Chromatographie échangeur d'ions

Heu zut je me suis trompée!
En fait j'aimerais que quelqu'un m'explique ce qu'est exactement la chroma écgangeur d'ions parce que je n'ai pas vraiment compris à part qu'on utilisait une résinechargées positivement ou négativement, suivant anions ou cations. Mais ca reste flou dans ma tête!
Ah oui et aussi la chroma en gel filtration: On utilise une colonne avec de petites billes, les petites rentrent dans le réseau donc sont freinées par rapport aux + grosses protéines. Encore une fois je ne comprends pas vraiment ni le principe ni l'utilité (Je croyais que la chroma servait à séparer différentes espèces?)

ba la chromato echangeuse d'ions, c'est pour separer les proteines selon leur charge ( --> acides aminés)et celle sur gel filtration, c'est pour les separer selon leur taille... donc ça te donne pas les mm infos sur les proteines qui etaient ds ton tube à essai.

on utilise la chromatographie par échange d'ions pour séparer une première fois les protéines extraites d'un tissu selon leur charge nette.

on dépose une phase liquide contenant le mélange protéique à la surface d'une colonne contenant une phase solide.
cette phase solide contient des billes chargées au choix soit négativement soit positivement.
admettons que les billes soient chargées positivement. lorsque le solvant protéique va migrer vers le bas, les protéines chargées (-) vont interagir avec les billes chargées (+).
ainsi, les premières protéines à tomber en bas de la colonne seront chargées (+), n'ayant pas pu interagir avec les billes +, et donc pas freinées dans leur progression.

plus une protéine est chargée (-) plus elle sera retenue sur la colonne et mettra du temps à sortir de la colonne.
c'est le meme principe si les billes sont (-) et les protéines chargées positivement

une fois cette 1ère séparation faite, on peut effectuer une chromatographie par filtration sur gel basée sur la taille des protéines.
la colonne se compose de billes poreuses. les grosses molécules ne peuvent pas passer dans ces pores.
elles passent entre les billes, ne sont pas retenues. elles sortent donc en 1er.
les molécules plus petites sont retardées car se coincent dans les pores des billes.

et après on peut utiliser la chroma d'affinité pour retenir une protéine particulière.
on ne l'utilise pas en 1er car il faut peu de protéines à séparer dans cette technique. les billes portent à leur surface un substrat reconnue par la protéine spécifique de ce substrat. elle va s'y lier de manière covalente.
les autres protéines non spécifiques de ce subtrat passent entre les billes le long de la colonne.

le but de la chroma est d'isoler une protéine dans le but d'étudier sa composition chimique, construire le strucure 3d de la protéine responsable de sa fonction.

Merci merci bcp!! Vous pouvez pas savoir comme ça m'aide!

Tiens je te mets un lien vers un petit topo sur la chromato (avec description des principales méthodes) qui trainait dans mes favoris

ici

(edit : liens vers les différents chapitres tout en bas de la première page)

[Edité le 18/09/05 par Messkalyne]