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Immunoprécipation

Aller en bas • 10 réponses
greg3838
Chef de pique-nique

Messages : 178
Enregistré : 27/07/2010
Posté le 23/12/2012 à 17:35 notnew
Bonjour,

j'ouvre un post au sujet d'un QCM dont j'ai la correction mais que je n'arrive pas à comprendre.
Le QCM est le suivant :

La protéine A fait 2kDa, la protéine B 3kDa, la protéine C 1kDa. Ces 3 protéines peuvent s'associer entre elles dans des complexes multimoléculaires.
Elles s'expriment toutes les 3 dans la lignée cellulaire A431.

L'immunoprécipitation de A dans les cellules A431 est réalisée :
A-Après migration en gel non dénaturant, on identifie la protéine B dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A au poids moléculaire de 2kDa.
B-Après migration en gel non dénaturant, on identifie la protéine B dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A au poids moléculaire de 6kDa.
C-Après migration en SDS-PAGE et transfert sur nitrocellulose, on identifie la protéine B dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A au poids moléculaire de 5kDa.
D-Après migration en SDS-PAGE et transfert sur nitrocellulose, on identifie la protéine C dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A.

La réponse est BD. Pour moi, c'est juste B et je ne comprends pas pourquoi D est juste.
Avez-vous une explication qui puisse m'aider à comprendre ?

Je vous remercie de votre aide,

Bonne soirée
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"Ce n'est pas les médecins qui nous manquent, mais la médecine."
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Santorini
Ministre de la Santé

Messages : 1498
Enregistré : 17/08/2011
Posté le 23/12/2012 à 18:06 puis édité 2 fois notnew
Salut!

Alors pour moi la D est correcte car le SDS charge ta protéine négativement mais ne détruit pas les ponts disulfure (sulfure!) etc. qui eux seront détruits par d'autres agents type dithiothréitol/ beta-mercaptoéthanol. Donc dans ton immunoprécipitation ton complexe est encore sous forme A+B+C, d'où le fait que tu puisses identifier chaque protéine par un anticorps reconnaissant indifféremment l'une des trois.

A confirmer tout de même. (?)

Bon courage pour ton concours!
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"Sans la liberté de flatter, il n'est pas d'éloge blâmeur" (Le petit rapporteur)
"Parler pour ne rien dire et ne rien dire pour parler sont les deux principes majeurs et fondamentaux de ceux qui feraient mieux de la fermer avant de l'ouvrir." Pierre DAC
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greg3838
Chef de pique-nique

Messages : 178
Enregistré : 27/07/2010
Posté le 23/12/2012 à 18:50 puis édité 1 fois notnew
Merci pour la réponse plutôt rapide.

Mais l'anti-corps se lie à la protéine avec une liaison faible ?
A ce moment-là, après dénaturation au SDS, les complexes multimoléculaires ne sont plus formés.

Ou alors, j'ai mal compris la chose et l'anti-corps est ajouté après avoir réalisé l’électrophorèse. A ce compte-là, D est bien juste.
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Santorini
Ministre de la Santé

Messages : 1498
Enregistré : 17/08/2011
Posté le 23/12/2012 à 18:54 notnew
Bah de rien^^

Sinon je pense que tu as raison, ça doit être comme un WB, l'anticorps est rajouté à la fin (ce qui paraît somme toute logique, non...?)
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greg3838
Chef de pique-nique

Messages : 178
Enregistré : 27/07/2010
Posté le 23/12/2012 à 19:11 notnew
Je pense que j'ai mal compris l'énoncé, c'est vrai que c'est plus logique de faire l'immunoprécipitation après.

Dans ce cas-là, BD juste.

Merci de m'avoir éclairé smilies
Bonnes fêtes de fin d'année
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Santorini
Ministre de la Santé

Messages : 1498
Enregistré : 17/08/2011
Posté le 23/12/2012 à 19:16 notnew
Fin après moi je vois ça comme ça, mais il faut avouer que parfois la biocell me surprend...
Si Natsu passe par là par exemple, il devrait pouvoir te donner une confirmation avec certitude...

En tout cas si j'ai pu t'aider c'est avec plaisir!
Bonnes fêtes de fin d'année à toi aussi et à tous ceux qui liront ce post!
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sandrine7811
Sainte Administratrice

Messages : 8947
Enregistré : 09/03/2005
Posté le 23/12/2012 à 23:11 notnew
généralement, peu importe la technique, tu fais ta migration, et ensuite tu révêles !
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greg3838
Chef de pique-nique

Messages : 178
Enregistré : 27/07/2010
Posté le 24/12/2012 à 12:26 notnew
Je vais relancer le débat, mais j'arrive pas à me convaincre de la réponse.

Même si on part du principe que l'anticorps est ajouté après, la formulation de l'item suggère que la protéine C forme un complexe avec A et B.
Comment peut-elle former un complexe, si on a dénaturé l'ensemble avec du SDS ?
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Santorini
Ministre de la Santé

Messages : 1498
Enregistré : 17/08/2011
Posté le 24/12/2012 à 13:09 notnew
Re smilies

Ben en fait, hormis par ce que je t'écrivais ailleurs, je ne vois pas ce qui pourrait expliquer ça...

Les protéines doivent former des complexes par liaison forte type pont disulfure, liaisons fortes qui ne sont pas détruites par le SDS. Hormis ça je ne vois pas, je ne sais pas, ou je ne sais plus ^^
Il n'y a pas de précision là dessus dans ton énoncé?
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greg3838
Chef de pique-nique

Messages : 178
Enregistré : 27/07/2010
Posté le 26/12/2012 à 14:57 notnew
J'ai eu d'autres explications et au final, c'est bien ce que tu disais au départ.

Une fois le complexe dénaturé, on peut identifier la protéine C puisqu'elle ne sera plus complexée.
De la même façon, la réponse C serait juste si au lieu de 5kDa, on aurait eu 3kDa.
La formulation de l'item est un peu mal faite je trouve.(SSSSSSSSSS)
On est plusieurs à être tombé dans le panneau.

Merci pour ta réponse et à sandrine7811 pour la sienne,
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Santorini
Ministre de la Santé

Messages : 1498
Enregistré : 17/08/2011
Posté le 26/12/2012 à 23:08 notnew
Tout est bien qui finit bien alors smilies

Bon courage Greg smilies
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